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全自動氨基酸分析儀的技術(shù)原理與工作流程解析

閱讀:83      發(fā)布時間:2025-6-12
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  全自動氨基酸分析儀基于離子交換色譜原理,結(jié)合茚三酮柱后衍生和光度法檢測技術(shù),實現(xiàn)對氨基酸的高效分離與定量分析。其核心在于利用陽離子交換樹脂對氨基酸的特異性吸附作用,結(jié)合流動相的pH梯度洗脫,實現(xiàn)復(fù)雜樣品中氨基酸的精準分離。
  技術(shù)原理
  氨基酸混合物在流動相(緩沖溶液)推動下,流經(jīng)裝有陽離子交換樹脂的色譜柱。不同氨基酸因結(jié)構(gòu)、酸堿性、極性差異,與樹脂中的交換基團發(fā)生離子交換,吸附能力不同。通過調(diào)節(jié)洗脫液的pH值和離子濃度,氨基酸按洗脫能力順序逐一釋放。洗脫出的氨基酸與茚三酮試劑在柱后反應(yīng)器中混合,于115-120℃下發(fā)生顯色反應(yīng),生成紫色或黃色化合物。這些有色產(chǎn)物在570nm(紫色)和440nm(黃色)波長下的吸光度與氨基酸濃度呈線性關(guān)系,符合朗伯-比爾定律,從而實現(xiàn)定量分析。
  工作流程
  樣品處理:蛋白質(zhì)樣品需經(jīng)酸水解或酶解,將蛋白質(zhì)分解為游離氨基酸。游離氨基酸樣品可直接上樣。
  氨基酸分離:樣品注入色譜柱后,通過三梯度分離技術(shù)(溫度、濃度、pH梯度)優(yōu)化分離效果,確保難分離組分(如色氨酸)的分離度。
  檢測與數(shù)據(jù)處理:分離后的氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成有色產(chǎn)物,經(jīng)可見光檢測器檢測吸光度。儀器自動繪制色譜圖,通過峰面積計算氨基酸含量,并生成定量報告。
  該技術(shù)具有高靈敏度(檢測限可達3-50pmol)、高重現(xiàn)性(峰面積重現(xiàn)性RSD≤1%)和自動化程度高的特點,廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

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