除了 Thermo CLONED AMV FIRST STRA SYN KIT,還有不少在分子生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,它們各有特點,適用于不同的實驗需求。
高容量 cDNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(High - Capacity cDNA Reverse Transcription Kit):由 Thermo Fisher Scientific 推出,完成一次逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)耗時 120 分鐘 。該試劑盒能夠從多種 RNA 樣本,如總 RNA 或 mRNA 中高效合成 cDNA,為后續(xù)大規(guī)模的基因表達(dá)分析、分子克隆等實驗提供充足的模板,適用于對 cDNA 產(chǎn)量有較高要求的實驗場景,例如構(gòu)建 cDNA 文庫時,可獲得豐富的 cDNA 資源。
SuperScript™ III 第一鏈合成系統(tǒng)(SuperScript™ III First - Strand Synthesis System for RT - PCR):同樣來自 Thermo Fisher Scientific,專為從純化的 poly (A)+ 或總 RNA 合成第一鏈 cDNA 而優(yōu)化。其使用的 SuperScript III 逆轉(zhuǎn)錄酶,可在較寬溫度范圍工作,對于具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的 RNA 模板,能通過適當(dāng)提高反應(yīng)溫度來破壞結(jié)構(gòu),保障逆轉(zhuǎn)錄順利進(jìn)行,在研究一些富含 GC 區(qū)域的基因表達(dá)時優(yōu)勢明顯,能準(zhǔn)確將對應(yīng)的 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。
Revertaid 第一鏈 cDNA 合成試劑盒(Revertaid First Strand cDNA Synthesis Kit):此試劑盒的組成十分全面,包含 Revertaid 逆轉(zhuǎn)錄酶、RiboLock RNase 抑制劑、5X 反應(yīng)緩沖液、dNTP mix、oligo (dT) 18 引物、隨機(jī)六聚體引物、對照 GAPDH RNA、正向和反向 GAPDH 引物以及無核酸酶水 。它在 60 分鐘內(nèi)即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),對 RNA 模板的適用性廣,無論是常規(guī)的 mRNA,還是一些具有特殊結(jié)構(gòu)的 RNA,都能實現(xiàn)高效逆轉(zhuǎn)錄,常用于基礎(chǔ)科研中對細(xì)胞內(nèi)各類基因表達(dá)情況的初步檢測。
TaqMan™逆轉(zhuǎn)錄試劑(TaqMan™ Reverse Transcription Reagents):該試劑盒專為逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)設(shè)計,最佳反應(yīng)溫度為 42°C,采用 Multiscribe 逆轉(zhuǎn)錄酶 。它與 TaqMan 實時定量 PCR 技術(shù)配套使用時效果,能夠精準(zhǔn)地將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA,并為后續(xù)基于 TaqMan 探針的定量 PCR 提供高質(zhì)量模板,在對基因表達(dá)進(jìn)行精準(zhǔn)定量分析,如疾病相關(guān)基因的表達(dá)量變化研究中應(yīng)用廣泛。
Roche 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(RT - PCR Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit):核心成分 Transcriptor 逆轉(zhuǎn)錄酶是在大腸桿菌中重組表達(dá)的,具有 RNA 指導(dǎo)的 DNA 聚合酶活性、DNA 依賴的 DNA 聚合酶活性、解旋活性以及可降解 RNA - DNA 雜合鏈中 RNA 的 RNase H 活性,這使得逆轉(zhuǎn)錄后無需額外進(jìn)行耗時的 RNase H 孵育步驟,縮短了反應(yīng)時間并降低成本 。該酶熱穩(wěn)定性高,可在高達(dá) 65°C 的溫度下工作,能合成長達(dá) 14 kb 的 cDNA 產(chǎn)物,特別適用于具有高二級結(jié)構(gòu)的富含 GC 模板的逆轉(zhuǎn)錄,同時試劑盒提供了隨機(jī)六聚體引物和錨定 oligo (dT) 18 引物等多種引物選擇,滿足不同類型 RNA 逆轉(zhuǎn)錄需求,在長片段基因的研究、復(fù)雜 RNA 樣本的分析中表現(xiàn)出色。
逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)(Reverse Transcription System - Promega):利用 AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶,可在 15 分鐘內(nèi)高效地將 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA,合成的 cDNA 可直接用于多次 PCR 擴(kuò)增 。試劑盒中同時包含 oligo (dT) 15 和隨機(jī)引物,適用于幾乎任何 RNA 來源的逆轉(zhuǎn)錄,還提供了一個 1.2 kb 的聚腺苷酸化 RNA 轉(zhuǎn)錄本作為 cDNA 合成的對照模板,方便研究人員優(yōu)化實驗參數(shù)、排查實驗問題,在對實驗時間要求較高,且需要快速獲得可靠逆轉(zhuǎn)錄結(jié)果的情況下,如緊急的病毒 RNA 檢測中較為適用。
Scriptum 第一鏈 cDNA 合成試劑盒(Scriptum First cDNA Synthesis Kit):涵蓋了第一鏈 cDNA 合成所需的所有試劑,使用優(yōu)質(zhì)的逆轉(zhuǎn)錄酶、超純 dNTPs 和優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液,確保結(jié)果具有高重復(fù)性 。其逆轉(zhuǎn)錄酶是經(jīng)重組生產(chǎn)的 M - MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶改良版本,消除了 RNase H 活性且提高了熱穩(wěn)定性,能夠合成高度結(jié)構(gòu)化的長 cDNA 片段,實現(xiàn)極其靈敏且高度特異的 RT - PCR 反應(yīng),可用于 DNA 標(biāo)記等實驗,在對 cDNA 質(zhì)量和實驗特異性要求嚴(yán)格的分子生物學(xué)實驗,如基因功能驗證相關(guān)的精確表達(dá)分析中發(fā)揮重要作用。
這些不同的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒,憑借各自的性能和特點,為科研人員在基因表達(dá)分析、病毒學(xué)研究、分子克隆等諸多領(lǐng)域的研究工作提供了多樣化的選擇